Useita PCR-kokeissa yleisesti käytettyjä entsyymejä

Polymeraasiketjureaktio, lyhennettynäPCRenglanniksi on molekyylibiologian tekniikka, jota käytetään spesifisten DNA-fragmenttien monistamiseen.Sitä voidaan pitää erityisenä DNA-replikaationa kehon ulkopuolella, mikä voi lisätä suuresti hyvin pientä DNA-määrää.Koko ajanPCRreaktioprosessissa yhdellä aineryhmällä on tärkeä rooli – entsyymeillä.

1. Taq DNA

Kokeissa alkuaikoinaPCR, tutkijat käyttivät Escherichia colin DNA-polymeraasi I:tä, mutta tässä entsyymissä on ongelma: sen on täydennettävä uutta entsyymiä joka kerta, kun sykli suoritetaan, mikä tekee toimenpiteen vaiheista hieman monimutkaista ja sitä on vaikea täydentää täysin automaattisesti.Tämä ongelma ratkesi sen jälkeen, kun tutkijat vahingossa eristivät Taq DNA -polymeraasin Thermus aquaticuksesta vuonna 1988. Sen jälkeen DNA:n automaattinen monistuminen on tullut todellisuutta.Tämän entsyymin löytö tekee myösPCRtekniikka kätevä, käytännöllinen ja universaali tekniikka.Tällä hetkellä Taq DNA -polymeraasi on yleisin polymeraasi DNA-sarjoissa.

2. PfuDNA

Kuten edellä mainittiin, Taq DNase:ssa on suuri bugi, joten tutkijat ovat modifioineet Taq DNA -polymeraasia jossain määrin välttääkseen epäspesifisen monistumisen, joka johtuu yhteensopimattomuudesta, mikä johtaa epätarkkoihin testituloksiin.Mutta Taq-DNA-polymeraasin modifikaatio voi estää DNA-polymeraasin aktiivisuuden huoneenlämpötilassa.PfuDNA-polymeraasi voi hyvin korvata edellä mainitut Taq-DNA-polymeraasin haitat, joten PCR-reaktio voidaan suorittaa normaalisti ja kohdegeenin monistumisen onnistumisnopeutta voidaan parantaa tehokkaasti.

3. Käänteinen transkriptaasi

Käänteistranskriptaasi löydettiin vuonna 1970. Tämä entsyymi käyttää RNA:ta templaattina, dNTP:tä substraattina, noudattaa emäspariutumisen periaatetta ja syntetisoi RNA-templaatin kanssa komplementaarisen yksijuosteisen DNA:n 5'-3'-suunnassa.Käänteistranskriptaasi on ensisijaisesti riippuvainen DNA- tai RNA-templaattien DNA-polymeraasiaktiivisuudesta, eikä sillä siksi ole 3'-5'-eksonukleaasiaktiivisuutta.Sillä on kuitenkin RNaasi H -aktiivisuutta, mikä rajoittaa käänteistranskriptaasin synteesin pituutta tietyssä määrin.Villin käänteiskopioijaentsyymin heikon tarkkuuden ja lämmönkestävyyden vuoksi tutkijat myös modifioivat sitä.

vartenPCRKokeissa tärkeimmät kulutustarvikkeet ovat: yksittäinen PCR-putki, 4/8-liuskainen PCR-putki, PCR-levyt.

LabionPCR-kulutustarvikkeeton seuraavatetuja:

PCR-levyt: Laaja lämpösyklilaitteen yhteensopivuus;Korkea kontrasti, helppo tunnistaa;hyvin fluoresenssiheijastus; hyvälämmönsiirto;Sertifioidut DNaasi-, RNaasi-, DNA-, PCR-estäjät ja testattu pyrogeenivapaa.

Yksittäiset PCR-putket: Haihtumiskestävä; hyvälämmönsiirto;erinomainen optinen kirkkaus; Sertifioidut DNaasi-, RNaasi-, DNA-, PCR-estäjät ja testattu pyrogeenivapaa.

4/8-nauhaiset PCR-putket: Erittäin ohuet seinät; korkea kirkkaus; hyvä fluoresenssiheijastus;voidaan käyttää lääketeollisuudessa, elintarviketeollisuudessa ja molekyylibiologiassa; korkealaatuinen, neitseellinen PP-materiaali; Sertifioidut DNaasi-, RNaasi-, DNA-, PCR-estäjät ja testattu pyrogeenivapaa.